异硫氰酸胍合成注意事项
2019-01-25
异硫氰酸胍合成注意事项
中文名称:异硫氰酸胍
英文名称:Guanidine thiocyanate
分子式:CH5N3.CHNS
分子量:118
Cas: 593-84-0
合成方法:
主要是由硫氰酸和胍合成而来
异硫氰酸胍是强用力的蛋白质变性剂,既能迅速溶解蛋白质,导致细胞结构破碎,核蛋白由于其二级结构的破坏消失而迅速与核酸分离,又对RNA酶有强烈的变性作用。因此,异硫氰酸胍可用于变性剂裂解细胞,使RNA与蛋白质分离,并将RNA释放到溶液中。然而,在异硫氰酸胍溶液的配制和使用中,经常会遇到一些问题。
异硫氰酸胍溶液是否需要现用现配?
提取试剂以异硫氰酸胍的终浓度为4M为例:先以42mM柠檬酸钠、0.83%N-lauryl sarcosine(十二烷基,N-甲基甘氨酸钠)、0.2mM β-巯基乙醇制得CSB缓冲液;异硫氰酸胍25g、CSB缓冲液33mL,混合直至完全溶解,可加热在65℃助溶,制得变性液,4℃保存备用。
所以,异硫氰酸胍溶液可以不必非要现用现配,而且目前市场上也有不同浓度的溶液销售,但放置时间不易过长,否则会有沉淀析出,在使用前需要仔细检查;另外,如果一次性配制过多,建议进行分装。
异硫氰酸胍溶液配制好之后是否需要灭菌?
异硫氰酸胍溶液并没有必要灭菌,该溶液并不是非常稳定,而且配裂解液一般要用0.1%的DEPC水,水已经进行过灭菌。另外提取RNA的所有试剂在配制时都需要用DEPC水配制,而且试剂最好为新开启并作为RNA专用。
虽然配制好的裂解液不需要灭菌,但要注意的是,实验中所用到的塑料制品,已经标明Rnase-Free的,如果没有开封使用过,可以直接使用,其他的都必须经过处理:在双蒸水中加入DEPC,使其终浓度为0.1%,将塑料制品浸泡其中,通风厨过夜,之后再用铝箔封住,高温高压灭菌至少30min,干燥备用。
中文名称:异硫氰酸胍
英文名称:Guanidine thiocyanate
分子式:CH5N3.CHNS
分子量:118
Cas: 593-84-0
合成方法:
主要是由硫氰酸和胍合成而来
异硫氰酸胍是强用力的蛋白质变性剂,既能迅速溶解蛋白质,导致细胞结构破碎,核蛋白由于其二级结构的破坏消失而迅速与核酸分离,又对RNA酶有强烈的变性作用。因此,异硫氰酸胍可用于变性剂裂解细胞,使RNA与蛋白质分离,并将RNA释放到溶液中。然而,在异硫氰酸胍溶液的配制和使用中,经常会遇到一些问题。
异硫氰酸胍溶液是否需要现用现配?
提取试剂以异硫氰酸胍的终浓度为4M为例:先以42mM柠檬酸钠、0.83%N-lauryl sarcosine(十二烷基,N-甲基甘氨酸钠)、0.2mM β-巯基乙醇制得CSB缓冲液;异硫氰酸胍25g、CSB缓冲液33mL,混合直至完全溶解,可加热在65℃助溶,制得变性液,4℃保存备用。
所以,异硫氰酸胍溶液可以不必非要现用现配,而且目前市场上也有不同浓度的溶液销售,但放置时间不易过长,否则会有沉淀析出,在使用前需要仔细检查;另外,如果一次性配制过多,建议进行分装。
异硫氰酸胍溶液配制好之后是否需要灭菌?
异硫氰酸胍溶液并没有必要灭菌,该溶液并不是非常稳定,而且配裂解液一般要用0.1%的DEPC水,水已经进行过灭菌。另外提取RNA的所有试剂在配制时都需要用DEPC水配制,而且试剂最好为新开启并作为RNA专用。
虽然配制好的裂解液不需要灭菌,但要注意的是,实验中所用到的塑料制品,已经标明Rnase-Free的,如果没有开封使用过,可以直接使用,其他的都必须经过处理:在双蒸水中加入DEPC,使其终浓度为0.1%,将塑料制品浸泡其中,通风厨过夜,之后再用铝箔封住,高温高压灭菌至少30min,干燥备用。