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2019-01-28
内毒素(Endotoxin)即革兰氏阴性菌细胞壁的脂多糖成分,菌体死亡崩解后释放出来。它又称热原质,会给机体带来一系列的不良反应,因此对生物制品需要进行内毒素测定。
内毒素检测要用到一种鲎试剂。鲎是一种海洋节肢动物,形似蟹,身体呈青褐色,包被硬质甲壳。鲎的血液是淡蓝色的,一遇到细菌就会凝固。人们利用这一特点开发出鲎试剂,即将鲎血液中的变形细胞进行溶解,将溶解物制成的无菌冷冻干燥品。这里面含有能被微量内毒素激活的凝固酶原,从而产生浑浊效应。
常见内毒素方法有凝胶法、浊度法和显色法。浊度法是根据浊度变化而测定内毒素含量,显色法是利用凝固酶的特定底物显色来测定内毒素含量,这两种方法可以定量。凝胶法是根据鲎试剂与内毒素产生的凝集反应来定性或半定量内毒素的方法。凝固酶能使凝固蛋白原产生凝胶,可肉眼观察,不用特殊的仪器设备。
检测时,要注意鲎试剂的灵敏度,不同鲎试剂的灵敏度不同。一般要采用标准品进行鲎试剂灵敏度的复核。确定供试品最大有效稀释倍数。同时实验器具也都要保证已去除热原。
内毒素和外毒素区别
1、存在部位
外毒素由活的细菌释放至细菌体外;内毒素为细菌细胞壁结构成份,菌体崩解后释出。
2、细菌种类
外毒素以革兰氏阳性菌多见;内毒素以革兰氏阴性菌多见。
3、化学组成
外毒素主要成分为蛋白质(分子量27,000~900,000);内毒素主要成分为磷脂一多糖一蛋白质复合物(毒性主要为类脂A)。
4、稳定性
外毒素不稳定,60℃以上能迅速破坏;内毒素耐热,60℃耐受数小时。
5、毒性作用
外毒素毒性强,微量对实验动物有致死作用(以ug计量)。各种外毒素有选择作用,引起特殊病变,不引起宿主发热反应。抑制蛋白质合成,有细胞毒性、神经毒性、紊乱水盐代谢等;内毒素毒性稍弱,对实验动物致死作用的量比外毒素为大。各种细菌内素的毒性作用大致相同。引起发热、弥漫性血管内凝血、粒细胞减少血症、施瓦兹曼现象等。
6、抗原性
外毒素抗原性强,可刺激机体产生高效价的抗毒素。经甲醛处理,可脱毒成为类毒霉,仍有较强的抗原性,可用于人工自动免疫;内毒素刺激机体对多糖成份产生抗体,不形成抗毒素,不能经甲醛处理成为类毒素。
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