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2019-02-25
核蛋白指在细胞质内合成,然后运输到核内起作用的一类蛋白质。如各种组蛋白、DNA合成酶类,RNA转录和加工的酶类、各种起调控作用的蛋白因子等。核蛋白一般都含有特殊的氨基酸信号,起蛋白质定向、定位作用。
细胞和动物组织核蛋白的提取方法:
 细胞蛋白提取:
1. 取5-10×106个细胞,在4℃,500×g条件下离心2-3分钟,小心吸取培养基,尽可能吸干,收集细胞。
2. 用冷PBS洗涤细胞两次,每次洗涤后尽可能吸干上清。
3. 每20ul细胞压积中加入200μl冷的Buffer A,2ul蛋白酶抑制剂混合物,高速涡旋振荡15秒,置冰上10分钟。
4. 再次高速涡旋振荡5秒,然后在4℃,16000×g条件下离心5分钟。
5. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到胞浆蛋白,请置于冰上或-80℃冰箱保存备用。
6. 在沉淀中加入200μl冷的Buffer B,2ul蛋白酶抑制剂混合物,高速涡旋振荡15秒。
7. 置冰上40分钟,每隔10分钟高速涡旋振荡15秒。
8. 在4℃,16000×g条件下离心10分钟。
9. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到核蛋白。
 组织蛋白提取:
1. 取适量组织样本剪碎,加冷PBS,用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体(或用液氮研磨),冰上静置5分钟,小心将上清吸入另一预冷的干净离心管。
2. 在4℃,500×g条件下离心2-3分钟,弃上清。
3. 每20ul细胞压积中加入200μl冷的Buffer A,2ul蛋白酶抑制剂混合物,高速涡旋振荡15秒,置冰上10分钟。
4. 再次高速涡旋振荡5秒,然后在4℃,16000×g条件下离心5分钟。
5. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到胞浆蛋白,请置于冰上或-80℃冰箱保存备用。
6. 在沉淀中加入200μl冷的Buffer B,2ul蛋白酶抑制剂混合物,高速涡旋振荡15秒。
7. 置冰上40分钟,每隔10分钟高速涡旋振荡15秒。
8. 在4℃,16000×g条件下离心10分钟。
9. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到核蛋白。
蛋白提取物请分装后于-80℃冰箱保存备用。
吉至试剂核蛋白提取试剂盒操作简单、方便,从培养细胞或新鲜组织中提核蛋白、整个过程只需60分钟即可将核蛋白和浆蛋白从细胞中分离出来。
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