线粒体提取试剂盒使用注意事项
2019-02-28
线粒体提取试剂盒用于动物细胞或组织中分离出完整而纯化的线粒体。适合用于动物软组织和硬组织及培养细胞的线粒体的制备。其制备物产量高,可用于细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组织学研究。产品不含污染性蛋白酶和核酶,即到既用性能稳定。
核线粒体的分离原理:
1.通过机械方法破裂细胞。
2.通过低速差速离心去除残渣碎屑和巨大细胞。
3.通过高速差速离心获得线粒体。
使用注意事项:
1.全程低温操作,将样品管放在冰水浴而不是碎冰中。
2.快速、微量制备比大规模制备操作更方便快捷,因而更容易获得完整的线粒体。
3.在不破坏亚细胞器的情况下、破碎细胞是制备线粒体的最关键环节。与组织块相比,培养细胞特别是贴壁培养细胞在用玻璃均浆时较难破壁,因而要选小容量、玻璃均浆器,间隙严密的研杵上下研磨培养细胞。在相差显微镜下检查未裂解细胞应在50%左右。研磨过度将破坏线粒体。研磨不足会降低得率。
4.离心力g计算正确的离心速度,不同离心机可依据此精确计算离心速度。
5.进行Western Blot和2D-胶电泳,可直接加入样品缓冲液裂解线粒体。
核线粒体的分离原理:
1.通过机械方法破裂细胞。
2.通过低速差速离心去除残渣碎屑和巨大细胞。
3.通过高速差速离心获得线粒体。
使用注意事项:
1.全程低温操作,将样品管放在冰水浴而不是碎冰中。
2.快速、微量制备比大规模制备操作更方便快捷,因而更容易获得完整的线粒体。
3.在不破坏亚细胞器的情况下、破碎细胞是制备线粒体的最关键环节。与组织块相比,培养细胞特别是贴壁培养细胞在用玻璃均浆时较难破壁,因而要选小容量、玻璃均浆器,间隙严密的研杵上下研磨培养细胞。在相差显微镜下检查未裂解细胞应在50%左右。研磨过度将破坏线粒体。研磨不足会降低得率。
4.离心力g计算正确的离心速度,不同离心机可依据此精确计算离心速度。
5.进行Western Blot和2D-胶电泳,可直接加入样品缓冲液裂解线粒体。