DAPI溶液配制与使用方法
2019-03-13
DAPI溶液用ddH2O配制而成，浓度为5 mg/ml。推荐工作浓度为0.5-10μg/ml。
DAPI，也称DAPI dihydrochloride，是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，和双链DNA结合后可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光。和EB(ethidium bromide)相比，对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。因为DAPI是含有特定AT序列DNA的一种嵌入剂，它能像Hoechst染料一样粘附在DNA双螺旋的小沟区。
尽管DAPI不能通过活细胞膜，但却能穿透扰乱的细胞膜而对核染色。DAPI具有很高的光漂白承受水平，能用来检测酵母线粒体DNA，叶绿体DNA，病毒DNA，microplasm DNA以及染色体DNA。DAPI-DNA复合物的激发和发射波长分别为360nm和460nm。
DAPI染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。DAPI也常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色。
DAPI溶液使用过程
1、用1mLddH2O将DAPI溶解，制得2.9mM的DAPI溶液（1mgDAPI/1mL H2O）。
注：DAPI不能直接用PBS等缓冲溶液溶解，需要先用水将其溶解。
2、取适量DAPI水溶液加到PBS中，制备成10~50µM的DAPI溶液。 推荐以下PBS的配制方法： 将8.00g NaCl、0.20g KCl、2.9g Na2HPO4·12H2O、0.2g KH2PO4溶解于1L纯水中。
3、将1/10培养基体积的DAPI溶液加入到细胞培养基中。也可以1/10浓度的DAPI缓冲液代替培养基。
4、在37℃培养细胞10~20分钟。
5、用PBS或合适的缓冲液洗细胞两次。
6、用带有360nm激发波长，460nm发射波长的滤光片的荧光显微镜观察细胞。
注意事项
1、DAPI对人体有一定刺激性，请注意适当防护。
2、荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。
3、为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。
4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
上海吉至生化科技有限公司
DAPI，也称DAPI dihydrochloride，是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，和双链DNA结合后可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光。和EB(ethidium bromide)相比，对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。因为DAPI是含有特定AT序列DNA的一种嵌入剂，它能像Hoechst染料一样粘附在DNA双螺旋的小沟区。
尽管DAPI不能通过活细胞膜，但却能穿透扰乱的细胞膜而对核染色。DAPI具有很高的光漂白承受水平，能用来检测酵母线粒体DNA，叶绿体DNA，病毒DNA，microplasm DNA以及染色体DNA。DAPI-DNA复合物的激发和发射波长分别为360nm和460nm。
DAPI染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。DAPI也常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色。
DAPI溶液使用过程
1、用1mLddH2O将DAPI溶解，制得2.9mM的DAPI溶液（1mgDAPI/1mL H2O）。
注：DAPI不能直接用PBS等缓冲溶液溶解，需要先用水将其溶解。
2、取适量DAPI水溶液加到PBS中，制备成10~50µM的DAPI溶液。 推荐以下PBS的配制方法： 将8.00g NaCl、0.20g KCl、2.9g Na2HPO4·12H2O、0.2g KH2PO4溶解于1L纯水中。
3、将1/10培养基体积的DAPI溶液加入到细胞培养基中。也可以1/10浓度的DAPI缓冲液代替培养基。
4、在37℃培养细胞10~20分钟。
5、用PBS或合适的缓冲液洗细胞两次。
6、用带有360nm激发波长，460nm发射波长的滤光片的荧光显微镜观察细胞。
注意事项
1、DAPI对人体有一定刺激性，请注意适当防护。
2、荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。
3、为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。
4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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