台盼蓝染色液实验使用步骤
2019-03-15
台盼蓝染液是细胞活性染料,常用于检测细胞膜的完整性。细胞损伤或死亡时,台盼蓝可穿透变性的细胞膜,与解体的DNA结合,使其着色。而活细胞能阻止染料进入细胞内。故可以检测细胞是否存活。
台盼蓝染色法的原理
正常的活细胞,胞膜结构完整,能够排斥台盼蓝,使之不能够进入胞内;而丧失活性或细胞膜不完整的细胞,胞膜的通透性增加,可被台盼蓝染成蓝色。通常认为细胞膜完整性丧失,即可认为细胞已经死亡,这与中性红作用相反。
因此,借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。台盼蓝是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。
注意凋亡小体也有台盼蓝拒染现象。台盼蓝染色后,通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数,就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。
实验步骤:
1. 用Hanks液配制0.1%台盼蓝溶液;
2. 用0.5%胰蛋白酶:0.2%EDTA=1:1混合液来消化培养的贴壁细胞;
3. 再加入适量Hanks液制成细胞悬液;
4. 将待染色细胞稀释至所需浓度(方法及浓度范围与细胞计数相同);
5. 每0.1ml细胞悬液约加新鲜配制的染液一小滴,室温下染3—5min;
6. 染色过的细胞材料,取一滴细胞悬液置玻片上,加盖玻片后放高倍镜下观察;
7. 死亡的细胞着浅蓝色并膨大,无光泽。活细胞不着色并保持正常形态,有光泽;
8. 计数1000个细胞中的活细胞和死细胞数目;
9. 统计未染色细胞。可按公式计算出细胞活率。
细胞活率(%)=未染色的细胞数/观察的细胞总数×100。
MTT染色原理,与台盼蓝染色原理有类似之处
活细胞中的某些物质(线粒体中的琥珀酸脱氢酶)能够和MTT反应,使MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(图1)并沉积在细胞中,而死细胞没有此功能。DMSO(二甲基亚砜)能够将此结晶(蓝紫色甲瓒)溶解,在酶联免疫检测仪490nm波长处测定其吸光值,能够间接的反应活细胞的数量。一定范围内,蓝紫色结晶沉淀的数量与细胞数成正比。目前MTT法因其灵敏度高,经济快速等优势被广泛的运用于细胞毒性试验,肿瘤药物的筛选、放射敏感性测定和对某些生物活性因子的活性检测(原核真核蛋白表达)等方面。对细胞活力有影响的表达蛋白活性检测可以通过MTT比色法进行。
上海吉至生化科技有限公司是一家专业生产销售各种试剂产品的公司。
台盼蓝染色法的原理
正常的活细胞,胞膜结构完整,能够排斥台盼蓝,使之不能够进入胞内;而丧失活性或细胞膜不完整的细胞,胞膜的通透性增加,可被台盼蓝染成蓝色。通常认为细胞膜完整性丧失,即可认为细胞已经死亡,这与中性红作用相反。
因此,借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。台盼蓝是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。
注意凋亡小体也有台盼蓝拒染现象。台盼蓝染色后,通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数,就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。
实验步骤:
1. 用Hanks液配制0.1%台盼蓝溶液;
2. 用0.5%胰蛋白酶:0.2%EDTA=1:1混合液来消化培养的贴壁细胞;
3. 再加入适量Hanks液制成细胞悬液;
4. 将待染色细胞稀释至所需浓度(方法及浓度范围与细胞计数相同);
5. 每0.1ml细胞悬液约加新鲜配制的染液一小滴,室温下染3—5min;
6. 染色过的细胞材料,取一滴细胞悬液置玻片上,加盖玻片后放高倍镜下观察;
7. 死亡的细胞着浅蓝色并膨大,无光泽。活细胞不着色并保持正常形态,有光泽;
8. 计数1000个细胞中的活细胞和死细胞数目;
9. 统计未染色细胞。可按公式计算出细胞活率。
细胞活率(%)=未染色的细胞数/观察的细胞总数×100。
MTT染色原理,与台盼蓝染色原理有类似之处
活细胞中的某些物质(线粒体中的琥珀酸脱氢酶)能够和MTT反应,使MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(图1)并沉积在细胞中,而死细胞没有此功能。DMSO(二甲基亚砜)能够将此结晶(蓝紫色甲瓒)溶解,在酶联免疫检测仪490nm波长处测定其吸光值,能够间接的反应活细胞的数量。一定范围内,蓝紫色结晶沉淀的数量与细胞数成正比。目前MTT法因其灵敏度高,经济快速等优势被广泛的运用于细胞毒性试验,肿瘤药物的筛选、放射敏感性测定和对某些生物活性因子的活性检测(原核真核蛋白表达)等方面。对细胞活力有影响的表达蛋白活性检测可以通过MTT比色法进行。
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