弹性蛋白酶检测方法
2019-08-14
弹性蛋白酶,是由动物的胰脏用水提取而成,也可用细菌的培养液在低温下用水提取获得。
弹性酶是由240个氨基酸组成的多肽,其CAS:39445-21-1,分子从链走向和空间构造型与胰凝乳蛋白酶相似。弹性酶是有丝氨酸的蛋白酶,它存在于所有动物的胰脏中。在人的动脉、皮肤、血小板和白血球中也存在弹性酶活力的物质。除此之外,一些微生物和植物中也具有弹性酶活力物质。
弹性蛋白是一种单纯蛋白、它不含辅助基和金属离子,其活性中心取决于特异的三维结构,当其中发生兵役,构型将会改变、引起失活。
弹性蛋白酶制备提取:
一般由动物的胰脏用水提取而得,也可用细菌的培养液在低温下用水提取而得。
弹性蛋白酶检测步骤:(仅供参考)
(1)准备适当数量的包被微孔。标准品、稀释标本加样量均为100μl/孔。五个标准品浓度依次为3000、1500、750、375 和0ng/ml(以标本稀释液作为0 标准)。
(2)用封片膜封板。以孵育振荡器(350 ~400rpm)室温(18 ~28℃)反应60min。
(3)弃去封板膜。洗板: 以洗涤液注满微孔,每次浸泡1min,共洗板5 次。
(4)每孔加酶结合物100μl。用封板膜封板。以孵育振荡器( 350 ~400rpm) 室温(18 ~28℃)反应45min。
(5)弃去封板膜。洗板:以洗涤液注满微孔,每次浸泡1min, 共洗板5 次。
(6)每孔加显色液100μl, 室温避光反应20min[显色液临用前配制。方法是:显色剂A: 显色剂B按体积比40: 1混合( 如显色剂A 400μl + 显色剂B 10μl),显色液配制后30min 内使用。
(7) 每孔加终止液100μl,充分混匀。15min 内上酶标仪双波长450/630nm 比色。
弹性酶是由240个氨基酸组成的多肽,其CAS:39445-21-1,分子从链走向和空间构造型与胰凝乳蛋白酶相似。弹性酶是有丝氨酸的蛋白酶,它存在于所有动物的胰脏中。在人的动脉、皮肤、血小板和白血球中也存在弹性酶活力的物质。除此之外,一些微生物和植物中也具有弹性酶活力物质。
弹性蛋白是一种单纯蛋白、它不含辅助基和金属离子,其活性中心取决于特异的三维结构,当其中发生兵役,构型将会改变、引起失活。
弹性蛋白酶制备提取:
一般由动物的胰脏用水提取而得,也可用细菌的培养液在低温下用水提取而得。
弹性蛋白酶检测步骤:(仅供参考)
(1)准备适当数量的包被微孔。标准品、稀释标本加样量均为100μl/孔。五个标准品浓度依次为3000、1500、750、375 和0ng/ml(以标本稀释液作为0 标准)。
(2)用封片膜封板。以孵育振荡器(350 ~400rpm)室温(18 ~28℃)反应60min。
(3)弃去封板膜。洗板: 以洗涤液注满微孔,每次浸泡1min,共洗板5 次。
(4)每孔加酶结合物100μl。用封板膜封板。以孵育振荡器( 350 ~400rpm) 室温(18 ~28℃)反应45min。
(5)弃去封板膜。洗板:以洗涤液注满微孔,每次浸泡1min, 共洗板5 次。
(6)每孔加显色液100μl, 室温避光反应20min[显色液临用前配制。方法是:显色剂A: 显色剂B按体积比40: 1混合( 如显色剂A 400μl + 显色剂B 10μl),显色液配制后30min 内使用。
(7) 每孔加终止液100μl,充分混匀。15min 内上酶标仪双波长450/630nm 比色。