蛋白酶K检测方法
2019-08-26
蛋白酶K是一种从白色念 珠菌分离出来的强力蛋白溶解酶,具有很高 的比活性,是DNA提取的关键试剂。
该酶 在较广的pH范围(4〜12.5)内及高温 (50〜70°C)均有活性,用于质粒或基因组 DNA、RNA的分离。在DNA提取中,主 要作用是酶解与核酸结合的组蛋白,使 DNA游离在溶液中,随后用不同方法进行 抽提,除去杂质,收集DNA。EDTA等螯 合剂或SDS等去垢剂均不能使之失活。
蛋白酶K贮存液一般为10mg/ml或20mg/ml。 贮存于一20°C。蛋白酶K溶液为无色透明, 如出现沉淀就不能使用。
蛋白酶K检测方法:
吸取2mL酶液至10mL离心管中,于55度锅中2分钟。加入2mL10g/L酪蛋白溶液,混均匀后置于55度锅中浴温5分钟。
在加入4mL0.4 mol/L三氯乙酸溶液混均匀,终止反应,静止5分钟。快速滤纸过滤,吸取3mL滤液置于比色皿275nm测量其吸光度数值。
测量前先用2mL相应缓冲液代替酶液进行反应后,将滤液置于275nm处凋零。
该酶 在较广的pH范围(4〜12.5)内及高温 (50〜70°C)均有活性,用于质粒或基因组 DNA、RNA的分离。在DNA提取中,主 要作用是酶解与核酸结合的组蛋白,使 DNA游离在溶液中,随后用不同方法进行 抽提,除去杂质,收集DNA。EDTA等螯 合剂或SDS等去垢剂均不能使之失活。
蛋白酶K贮存液一般为10mg/ml或20mg/ml。 贮存于一20°C。蛋白酶K溶液为无色透明, 如出现沉淀就不能使用。
蛋白酶K检测方法:
吸取2mL酶液至10mL离心管中,于55度锅中2分钟。加入2mL10g/L酪蛋白溶液,混均匀后置于55度锅中浴温5分钟。
在加入4mL0.4 mol/L三氯乙酸溶液混均匀,终止反应,静止5分钟。快速滤纸过滤,吸取3mL滤液置于比色皿275nm测量其吸光度数值。
测量前先用2mL相应缓冲液代替酶液进行反应后,将滤液置于275nm处凋零。