异硫氰酸胍核酸解离液在核酸提取纯化中的作用
核酸样本提取分为蛋白与核酸解离和核酸提取两部分,目前的核酸提取与纯化大多采用树脂吸附法或磁珠吸附法,需配备高速离心机或自动核酸提取仪,总耗时较长,为了解决现有问题,李小锋等人研发了一种核酸解离液,解离液由异硫氰酸胍、水饱和酚、醇类还原剂和8-羟基喹啉组成,解离液中的各组分及其浓度和pH值如下:
异硫氰酸胍:摩尔浓度为1mol/L-2mol/L;
水饱和酚:质量百分比浓度为25%50%;
醇类还原剂:醇类还原剂为2-巯基乙醇或二硫苏糖醇,质量百分比浓度为0.175%-0.35%;
8-羟基喹啉:质量百分比浓度为0.05%-0.1%;
解离液的PH值为7.0-8.5。
该解离液与凝胶柱联合应用,具有如下有益效果:
(1)快速裂解细胞,实现1分钟内完成核酸提取,其解离提取的核酸可直接用于PCR反应,大幅度缩短PCR核酸诊断整个操作时间;
(2)可长时间保持核酸的完整性:从样品取样、运输到实验室提取核酸,短到三分钟、长至一周的时间内,均可保持核酸的完整性;
(3)不需配备昂贵的设备,只需一台掌上离心机即可。