葡聚糖凝胶C-25是颗粒状，使用时需要溶胀，其溶胀比取决于所使用的缓冲溶液，不同溶液中的溶胀比不同，而且存在较大差异。溶胀时不能使用磁力搅拌，否则易导致凝胶破碎。
 预处理:
称取所需量的葡聚糖凝胶C-25，置于 50~100 倍蒸馏水或者上样平衡液中，溶胀，室温条件下一般需要溶胀1~2天，沸水中一般需要2小时。
按每克葡聚糖凝胶C-25加0.5（MHCl）15ml的比例，将葡聚糖凝胶C-25浸泡于0.5M、HCl中，搅匀，静置30分钟，装入布氏漏斗（垫有2层滤纸）中抽滤，并反复用蒸馏水抽洗至pH呈中性；然后以0.5M、NaOH同上操作过程处理，最后以0.5M、HCl再处理一次。
装柱：
装柱按照标准操作规程操作。必须保证每种材料都处于工作温度，凝胶装柱前需要脱气 。
平衡：
使用2~5倍柱床体积的上样平衡液平衡柱子，务必使流出液的电导和pH同上样缓冲液的
电导和pH完全一致。
上样：
根据目标产物浓度和凝胶的载量确定上样量。
清洗：
上样完毕后，再使用上样缓冲液平衡柱子，清洗掉不结合的蛋白和杂质，直至流出液的电导和pH同上样缓冲液的电导和pH完全一致。
洗脱：
使用增大缓冲液中盐离子浓度或者增加 pH 的连续洗脱或者梯度洗脱。
 再生：
在柱上先用1~2M、NaCl洗去柱上的杂蛋白，再用蒸馏水洗去柱中盐。然后按预处理过程将葡聚糖凝胶C-25再处理一遍即可。
存储：
葡聚糖凝胶C-25干粉保存于4~25℃、干燥、通风、清洁处；溶胀后的凝胶保存于4~8℃
20%乙醇溶液或0.01M、NaOH中。